一、試驗原理

      細胞劃痕法是簡捷測定細胞遷移運動和修復能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的*區域劃線，去除*部分細胞，然后繼續培養細胞至試驗設定時間，觀察周邊細胞是否遷移至*劃痕區，以此判斷細胞的生長遷移能力。試驗通常需設定對照組和供試品組，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區修復能力的不同可以判斷供試品遷移與修復能力。

二、適用對象

      包括加了某種處理因素、藥物、重組蛋白、外源性基因、生長因子等供試品。

三、試驗步驟

1）所有使用的器具均需要滅菌，包括直尺和marker筆在使用前需要放在潔凈臺內用紫外燈照射30min以上；

2）用marker筆比著直尺在6孔板背后每孔橫向和縱向各三等份劃線做記號，按照5×105cell/孔接種細胞，具體數量可根據細胞不同而調整，目標以過夜能達到95%以上匯合率為宜；

3）細胞培養24h后用10μL槍頭比著直尺對準孔板，輕推橫向、縱向劃線形成劃痕，用PBS漂洗細胞3次，去除劃掉的細胞；

4）在對照組和供試品組孔中加入無血清培養基配制的供試品和對照樣品，空白對照組只加入無血清培養基；

5）轉移至37℃、5%CO2培養箱中，于0h、24h時，以橫向和縱向的交點為核心，在顯微鏡下拍照；

注1：在用PBS緩沖液沖洗時，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼壁細胞，影響試驗拍照結果。

注2：一般做劃痕試驗，都是無血清或者低血清(<2%），否則細胞增殖就不能忽略。

注3：不同孔之間較好用同一個槍頭。

四、數據統計

      測量劃痕區面積，通過固定劃痕區移行細胞的總面積除以固定劃痕區初始面積，計算每組細胞遷移率。

試驗示例

1.試驗材料

3. 試驗結果

對照組-0h	對照組-24h
對照組-48h	對照組-72h
試驗組-0h	試驗組-24h
試驗組-48h	試驗組-72h

注：如果長時間觀察時，需考慮到劃痕縮小是細胞遷移和細胞繁殖共同作用的結果，而不是單純的細胞遷移，如果要單純的考慮細胞遷移，先用絲裂霉素（1 μg/mL）處理一小時，抑制細胞的分裂。另外，使用無血清培養基也可以降低細胞增殖對實驗結果的影響，但同時由于細胞內信號傳導系統整體性的下調節，細胞遷移的速度也會有所改變。