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    重組膠原蛋白檢測
    重組膠原蛋白檢測

    重組膠原蛋白檢測

     

           膠原蛋白是細胞外基質的主要成分,是人體內含量較多、分布較廣的功能性蛋白,作為支持組織和結締組織的主要組分,可以起到支持、保護、連接等多種作用;而對人體皮膚而言,膠原蛋白在真皮層中含量高達70%-80%,是維持皮膚彈性的主要成分。

    重組膠原蛋白檢測

           隨著對膠原蛋白結構及功能特點的研究深入,其營養性、修復性、保濕性、配伍性、親和性等特性逐步被挖掘, 因此,膠原蛋白已被廣泛應用于食品保健品、藥品、醫療產品、美容化妝品等產品領域。按照膠原蛋白成分來源分類,膠原蛋白大致可分為動物源性膠原蛋白及基因重組膠原蛋白兩類,相比于動物源性膠原蛋白,基因重組膠原蛋白具有表達量大、水溶性好、生物活性高等特點,且重組膠原蛋白應用生物基因工程技術生產,避免了病毒污染風險,而由于其和人膠原蛋白高活性區氨基酸序列高度匹配,免疫原性風險更低,在醫療產品等領域有更廣闊的應用前景。

    重組膠原蛋白檢測1

           基于重組膠原蛋白的優良特性,近年來,國家藥監局先后頒布多項重組膠原蛋白行業標準及政策法規文件,規范和監督行業發展。2021年4月,國家藥監局發布《重組膠原蛋白類醫療產品分類界定原則》;2022年1月,YY/T 1849-2022《重組膠原蛋白》行業標準正式發布;2023年1月,YY/T 1888-2023《重組人源化膠原蛋白》行業標準正式發布,同年5月,國家藥監局發布了《重組膠原蛋白創面敷料注冊審查指導原則》何《重組人源化膠原蛋白原材料評價指導原則》。

           依照行業標準和技術指導原則,作為原材料的重組膠原蛋白,應對其理化項目,鑒別,雜質、污染物和添加劑,結構表征、生物學功能、生物學評價等指標進行技術評價,同時,對于按二類醫療器械管理的重組膠原蛋白創面敷料的申報,除需提供性能指標檢測、生物學特性研究、穩定性研究等檢測/研究資料外,還需提供產品不可被人體吸收的相關研究資料。

           廣東省華微檢測股份有限公司是一家專注于生物醫藥及生物安全領域的第三方檢驗檢測機構,取得廣東省CMA資質/CNAS資質/醫療器械領域**CMA資質。建有超2000m2理化+微生物+細胞實驗室,1600m2動物實驗中心,配有圓二色譜儀、紅外光譜儀、液相色譜儀、質譜儀等檢驗檢測設備,可為各類膠原蛋白產品,提供理化、鑒別、雜質及污染物、生物學功能、生物學評價、安全性試驗等各項檢驗檢測服務。此外,華微檢測參與了T/GDMDMA 0029-2023《重組膠原蛋白醫用敷料體外透皮吸收評價指南(熒光標記法)》團體標準的制定,截至目前,已開展10余項重組膠原蛋白產品的體外透皮吸收評價工作,作為重組膠原蛋白創面敷料不被人體吸收提供研究資料。

    重組膠原蛋白檢測-參編證明

     

           附表:檢測指標

    YY/T 1888-2023 重組人源化膠原蛋白

    序號

    分類

    檢測項目

    檢測方法

    1

    理化性質

    外觀

    肉眼觀測

    2

    可見異物

    《中國藥典》0904可見異物檢查法 燈檢法

    3

    水溶解性/鹽溶解性

    ——

    4

    水分

    《中國藥典》 0832水分測定法 第二法烘干法

    5

    熾灼殘渣

    《中國藥典》 0841熾灼殘渣檢查法

    6

    酸堿度

    《中國藥典》 0631pH值的測定

    7

    等電點

    《中國藥典》 0542 毛細管電泳法

    8

    滲透壓摩爾濃度

    《中國藥典》 0632滲透壓摩爾濃度測定

    9

    總蛋白質含量

    《中國藥典》0731 蛋白質含量測定法 第一法

    10

    純度

    《中國藥典》 0514分子排阻色譜法/0512高效液相色譜法

    11

    裝量

    《中國藥典》 0942較低裝量檢查法

    12

    鑒別

    氨基酸序列確認

    質譜法

    13

    肽段覆蓋率(氨基酸序列覆蓋度)

    質譜法

    14

    末端氨基酸序列

    質譜法

    15

    肽圖

    《中國藥典》 3405肽圖檢查法 第一法

    16

    分子量

    高分辨質譜法/SDS-PAGE

    17

    雜質、污染物和添加劑

    外源性DNA殘留量

    YY/T1849-2022 5.5.2

    18

    大腸桿菌蛋白質殘留量

    《中國藥典》3412 或經驗證的酶聯免疫試劑盒

    19

    酵母蛋白質殘留量

    《中國藥典》3414 或經驗證的酶聯免疫試劑盒

    20

    CHO細胞蛋白質殘留量

    經驗證的酶聯免疫試劑盒

    21

    肽聚糖

    細菌肽聚糖檢測試劑盒

    22

    添加劑

    ——

    23

    重金屬及微量元素

    《中國藥典》 0821重金屬檢查法

    24

    殘余抗生素含量

    YY/T 1849-2022 5.5.6

    25

    殘余抗生素活性

    《中國藥典》 1201抗生素微生物檢定法或3408抗生素殘留量檢查法

    26

    微生物限度

    《中國藥典》 1105、1106

    27

    無菌

    《中國藥典》 1101無菌檢查法

    28

    細菌內毒素

    《中國藥典》 1143細菌內毒素檢測法

    29

    結構表征

    氨基酸異質性分析

    脫酰胺化、氧化、糖譜/糖基化修飾等

    YY/T 1849-2022 5.7.1、5.7.8

    30

    脯氨酸羥基化

    YY/T 1849-2022 5.7.7

    31

    高級結構分析

    圓二色光譜

    YY/T 1888-2023 附錄B

    32

    微量差示掃描量熱譜

    YY/T 1888-2023 附錄C

    33

    紅外光譜

    《中國藥典》 0402紅外分光光度法

    34

    拉曼光譜

    《中國藥典》 0421拉曼光譜法

    35

    穩定性

    穩定性

    ——

    36

    生物學評價

    生物學評價

    GB/T16886.1

    37

    免疫學評價

    GB/T16886.20、YY/T1465

     


    YY/T 1849-2022 重組膠原蛋白

    分類

    檢測項目

    檢測方法

    1

    理化項目

    外觀

    肉眼觀測

    2

    可見異物

    《中國藥典》0904可見異物檢查法 燈檢法

    3

    溶解性

    ——

    4

    水分

    《中國藥典》 0832水分測定法 第二法烘干法

    5

    熾灼殘渣

    《中國藥典》 0841熾灼殘渣檢查法

    6

    pH

    《中國藥典》 0631pH值的測定

    7

    滲透壓摩爾濃度

    《中國藥典》 0632滲透壓摩爾濃度測定

    8

    動力黏度

    《中國藥典》 旋轉黏度法

    9

    熱穩定性

    《中國藥典》 熱分析法

    10

    裝量及其差異

    《中國藥典》 0942較低裝量檢查法

    11

    鑒別

    肽圖

    《中國藥典》 3405肽圖檢查法 第一法/《中國藥典》 0431質譜法

    12

    末端氨基酸序列

    質譜法

    13

    分子量

    《中國藥典》0512高效液相色譜法/0431質譜法

    14

    等電點

    《中國藥典》 0542 毛細管電泳法

    15

    純度

    《中國藥典》 0541第四法聚丙烯酰胺凝膠電泳法/0514分子排阻色譜法

    16

    雜質、污染物和添加劑

    外源性DNA殘留

    《中國藥典》3407 外源性DNA殘留量測定法

    17

    大腸桿菌蛋白質殘留量

    《中國藥典》3412 或經驗證的酶聯免疫試劑盒

    18

    酵母蛋白質殘留量

    《中國藥典》3414 或經驗證的酶聯免疫試劑盒

    19

    CHO細胞蛋白質殘留量

    經驗證的酶聯免疫試劑盒

    20

    殘余抗生素含量

    《中國藥典》3408 抗生素殘留量檢查法

    21

    殘余抗生素活性

    《中國藥典》3429 免疫化學法一、酶聯免疫吸附法

    22

    促炎性污染物(肽聚糖等)

    經驗證的試劑盒

    23

     

    重金屬及微量元素

    《中國藥典》0821 重金屬檢查法/0412 電感耦合等離子體質譜法

    24

    含量

    含量

    《中國藥典》0731 蛋白質含量測定法 第一法

    25

    結構表征

    異質性分析

    質譜法

    26

    一級結構表征

    質譜法

    27

    紅外光譜

    FTIR

    28

    圓二色光譜

    CD

    29

    微量差熱分析

    DSC

    30

    脯氨酸羥基化分析

    氨基酸組成分析

    31

    糖譜/糖基化修飾分析

    高效液相色譜法/毛細管電泳法/高校陰離子色譜法

    32

    生物學功能

    細胞增殖

    細胞實驗

    33

    細胞分化

    34

    細胞黏附性

    35

    細胞的遷移或移行

    36

    安全性試驗

    無菌

    《中國藥典》 1101無菌檢查法

    37

    細菌內毒素

    《中國藥典》 1143細菌內毒素檢測法

    38

    微生物限度

    《中國藥典》1105、1106

    39

    穩定性

    穩定性

    ——

    40

    生物學評價

    生物學評價

    GB/T16886.1

    41

    免疫學評價

    GB/T16886.20、YY/T1465



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